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Título: Avaliação de parâmetros de crescimento das leveduras Kluyveromyces marxianus, Kluyveromyces lactis e Saccharomyces cerevisiae.
Autor: Veiga, Luísa Helena Farias Alves
Endereco Lattes do autor: http://lattes.cnpq.br/3226662191542782
Orientador: Ferreira, Éder Galinari
Endereco Lattes do orientador : http://lattes.cnpq.br/7670722046479986
Palavras-chave: Levedura;Velocidade máxima de crescimento;Constante de saturação;Biomassa microbiana
Data do documento: 31-Mai-2022
Citação: VEIGA, Luísa Helena Farias Alves. Avaliação de parâmetros de crescimento das leveduras Kluyveromyces marxianus, Kluyveromyces lactis e Saccharomyces cerevisiae. 2022. 37 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Bacharelado em Ciências Biológicas) - Departamento de Biologia, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Recife, 2022.
Abstract: The microorganisms most used in industries are yeasts. Kluyveromyces lactis is used in the production of proteins and the enzyme β-galactosidase by the pharmaceutical industry, in addition to the production of heterologous proteins of biotechnological importance. Kluyveromyces marxianus has metabolic diversity, thermotolerance, assimilates lactose as a source of energy and carbon and has the highest maximum growth rate (μmax) known among eukaryotic microorganisms. S. cerevisiae is widely used in fermented products, such as breads and alcoholic beverages, and can also be used in the bioremediation of heavy metals, such as zinc, mercury, lead, cadmium, nickel, arsenic, gold, chromium, uranium, and platinum. To produce yeast biomass on anindustrial scale, it is important to know some parameters such as the maximum growth rate and the saturation constant, as well as to determine the biomass production quickly. In this case, it is possible to correlate the biomass with the cell optical density. Thus, the objective of this work wasto compare the growth of K. marxianus, K. lactis and S. cerevisiae yeasts in YP medium with different glucose concentrations [2.5 g/L, 5.0 g/L, 10.0 g/L, and 20.0 g/L (w/v)], determining their maximum growth rates, the saturation constant and correlating biomass production with cellular optical densities. K. marxianus was incubated at 37 °C and K. lactis and S. cerevisiae at 30 °C in ashaker at 200 rpm. The cell optical density (OD) was determined in a spectrophotometer (600 nm).The optical density was measured after 2, 3, 4, 5 and 6 h of incubation. The maximum growth rates and saturation constants obtained for K. marxianus, K. lactis and S. cerevisiae were, respectively, 0.69 h-1 and 0.17 g/L, 0.45 h-1 and 0.385 g /L, 0.47 h-1 and 0.54 g/L. To calculate the correlation of biomass with cell optical densities, dilutions were prepared from a mother microbial suspension of each yeast species, obtaining dilutions 1:0, 1:1, 1:2, 1:4, 1:8 and 1:16. Considering these dilutions, respectively, the OD and biomass obtained for K. marxianus were 53.15 and 23.0 g/L, 27.68 and 12.0 g/L, 12.76 and 6.7 g/L, 7, 33 and 4.4 g/L, 4.04 and 2.9 g/L, 2.1 and 1.7 g/L. Likewise, for K. lactis the OD and biomass determined were 59.35 and 21 g/L, 28.80 and 11 g/L, 13.95 and 6.3 g/L, 8.16 and 3.4 g/L, 4.53 and 1.9 g/L, 2.25 and 1.2 g/L. And yet, for S. cerevisiae the OD andbiomass calculated were 39.3 and 16 g/L, 19.13 and 8.5 g/L, 9.04 and 4.7 g/L, 4.82 and 3, 4 g/L, 2.55 and 1.4 g/L, 1.39 and 1.2 g/L. It is concluded that, under the conditions evaluated, the yeast K. marxianus exhibited higher maximum growth velocity and biomass, with a lower saturation constant of glucose transporters when compared to K. lactis and S. cerevisiae.
Resumo: Os microrganismos mais utilizados nas indústrias são as leveduras. A Kluyveromyces lactis é utilizada na produção de proteínas e da enzima β-galactosidase pela indústria farmacêutica, além da produção de proteínas heterólogas de importância biotecnológica. A Kluyveromyces marxianuspossui diversidade metabólica, termotolerância, assimila lactose como fonte de energia e carbono e tem a maior velocidade máxima de crescimento (μmáx) conhecida dentre os microrganismoseucarióticos. A S. cerevisiae é muito utilizada em produtos fermentados, como pães e bebidas alcoólicas, e ainda, pode ser usada na biorremediação de metais pesados, como o zinco, mercúrio, chumbo, cádmio, níquel, arsênico, ouro, cromo, urânio e platina. Para a produção de biomassa de leveduras em escala industrial, é importante conhecer alguns parâmetros como a velocidade máxima de crescimento e a constante de saturação, bem como determinar a produção da biomassa de forma rápida. Neste caso, é possível correlacionar a biomassa com a densidade óptica celular. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi comparar os crescimentos das leveduras K. marxianus, K. lactis e S. cerevisiae em meio YP com diferentes concentrações de glicose [2,5 g/L, 5,0 g/L, 10,0 g/L, e 20,0 g/L (p/v)], determinado suas velocidades máximas de crescimento, a constante de saturação e correlacionando a produção de biomassa com as densidades ópticas celulares. K. marxianus foi incubada a 37 ºC e K. lactis e S. cerevisiae a 30 ºC em shaker a 200 rpm. Determinou-se a densidadeóptica celular (DO) em espectrofotômetro (600 nm). Mediu-se a DO após 2, 3, 4, 5 e 6 h de incubação. As velocidades máximas de crescimento e as constantes de saturação obtidas para K. marxianus, K. lactis e S. cerevisiae foram, respectivamente, 0,69 h-1 e 0,17 g/L, 0,45 h-1 e 0,385 g/L, 0,47 h-1 e 0,54 g/L. Para o cálculo da correlação das biomassas com as densidades ópticas celulares foram preparadas diluições a partir de uma suspensão microbiana mãe de cada espécie de levedura, obtendo as diluições 1:0, 1:1, 1:2, 1:4, 1:8 e 1:16. Considerando respectivamente essas diluições, as DO e biomassas obtidas para K. marxianus foram 53,15 e 23,0 g/L, 27,68 e 12,0 g/L,12,76 e 6,7 g/L, 7,33 e 4,4 g/L, 4,04 e 2,9 g/L, 2,1 e 1,7 g/L. Da mesma forma, para K. lactis as DO e biomassas determinadas foram 59,35 e 21 g/L, 28,80 e 11 g/L, 13,95 e 6,3 g/L, 8,16 e 3,4 g/L, 4,53 e 1,9 g/L, 2,25 e 1,2 g/L. E ainda, para S. cerevisiae as DO e biomassas calculadas foram 39,3e 16 g/L, 19,13 e 8,5 g/L, 9,04 e 4,7 g/L, 4,82 e 3,4 g/L, 2,55 e 1,4 g/L, 1,39 e 1,2 g/L. Conclui-se que, nas condições avaliadas, a levedura K. marxianus exibiu maiores velocidade máxima de crescimento e biomassa, com uma menor constante de saturação dos transportadores de glicose quando comparada a K. lactis e S. cerevisiae..
URI: https://repository.ufrpe.br/handle/123456789/3131
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